生活饮用水的环保检测，微生物指标检测方法有哪些？​

生活饮用水微生物指标检测的核心目标是判断水中是否存在致病微生物、评估水质卫生安全，检测方法主要围绕细菌总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌等关键指标展开，以下是常用的标准检测方法，均符合《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2022）要求：

一、 菌落总数检测（平皿计数法）

菌落总数是评估饮用水受微生物污染程度的基础指标，反映水中细菌的总体数量水平。

原理：将一定体积的水样接种到营养琼脂培养基上，在 36℃±1℃ 条件下培养 48h±2h，培养基上生长出的单个菌落来源于水中的单个细菌或细菌群体，通过计数菌落数量，换算出每毫升水样中的菌落总数。

操作步骤

水样稀释：根据水质清洁程度，将水样做 10 倍系列稀释（清洁饮用水可直接取样），避免菌落数过多或过少导致计数误差。

接种培养：取不同稀释度的水样各 1mL，注入无菌平皿，再加入融化冷却至 45℃左右的营养琼脂培养基，摇匀后静置凝固。

计数判定：培养结束后，选取菌落数在 30～300 之间 的平皿进行计数，计算平均值并换算成每毫升水样的菌落数。

适用场景：适用于各类生活饮用水的微生物污染程度初步筛查。

二、 总大肠菌群检测

总大肠菌群是粪便污染的指示菌，若水中检出该菌群，说明可能存在肠道致病菌污染风险，常用方法有多管发酵法和滤膜法。

多管发酵法（经典方法）

原理：利用大肠菌群能发酵乳糖产酸产气的特性，分初发酵、复发酵、证实试验三步完成检测。

操作步骤

① 初发酵：取不同体积的水样接种到乳糖蛋白胨培养液中，36℃±1℃培养 24h±2h，观察是否产气，产气者为可疑阳性管。

② 复发酵：将可疑阳性管的培养液接种到伊红美蓝琼脂培养基上，培养后观察菌落形态（典型大肠菌群菌落呈紫黑色带金属光泽）。

③ 证实试验：挑取典型菌落接种到乳糖蛋白胨培养液，若再次产气产酸，则判定为阳性管，最后根据阳性管数查 MPN表，得出每 100mL 水样中的总大肠菌群数。

适用场景：适合浑浊度高、杂质多的水样，如水源水、经过初步处理的饮用水。

滤膜法（快速检测法）

原理：用孔径为 0.45μm 的无菌滤膜过滤定量水样，水中的细菌会被截留在滤膜表面，再将滤膜贴在乳糖蛋白胨琼脂培养基上培养，直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落。

操作步骤：量取 100mL 水样通过滤膜过滤→将滤膜转移至培养基表面→36℃±1℃培养 24h±2h→计数紫黑色带金属光泽的典型菌落，即为每 100mL 水样中的总大肠菌群数。

适用场景：适合清洁的饮用水、矿泉水等低浑浊度水样，检测效率高于多管发酵法。

三、 粪大肠菌群与大肠埃希氏菌检测

粪大肠菌群是总大肠菌群中的耐热菌群，更能准确指示近期粪便污染；大肠埃希氏菌则是直接的粪便污染指示菌，两者常用检测方法如下：

粪大肠菌群检测（耐热性试验法）

原理：粪大肠菌群能在 44.5℃±0.2℃ 高温条件下发酵乳糖产酸产气，而其他大肠菌群无法耐受该温度。

操作步骤：取总大肠菌群检测中的可疑阳性菌落或培养液，接种到 EC 肉汤培养基中，在 44.5℃水浴条件下培养 24h±2h，观察是否产气，产气者即为粪大肠菌群阳性。

大肠埃希氏菌检测（酶底物法）

原理：利用大肠埃希氏菌产生的 β- 葡萄糖醛酸酶，分解特定底物释放荧光物质，在紫外灯下可观察到荧光反应。

操作步骤：将水样接种到酶底物培养基中，36℃±1℃培养 24h～48h，若培养基出现荧光，且结合菌落形态或生化试验确认，即可判定存在大肠埃希氏菌。

优势：特异性强、灵敏度高，是目前检测大肠埃希氏菌的常用快速方法。

四、 其他微生物指标的补充检测方法

除上述核心指标外，生活饮用水还会根据需求检测致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌）、霉菌、酵母菌等指标，方法如下：

致病菌检测：采用选择性培养基分离培养（如沙门氏菌用 SS 琼脂培养基），结合生化鉴定、血清学试验确认。

霉菌和酵母菌检测：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，在 25℃～28℃条件下培养 5～7 天，计数菌落数量。

关键注意事项

所有检测操作需在无菌实验室进行，避免实验环境中的微生物污染水样。

检测所用的培养基、器皿须经过高压蒸汽灭菌，确保无菌状态。

检测过程中需设置空白对照，排除实验材料和操作带来的干扰。